ФЕДЕРАЛЬНОЕ ГОСУДАРСТВЕННОЕ УЧРЕЖДЕНИЕ ЗДРАВООХРАНЕНИЯ
РОСТОВСКИЙ -на- ДОНУ ОРДЕНА ТРУДОВОГО КРАСНОГО ЗНАМЕНИ
НАУЧНО-ИССЛЕДОВАТЕЛЬСКИЙ ПРОТИВОЧУМНЫЙ ИНСТИТУТ
ФЕДЕРАЛЬНОЙ СЛУЖБЫ ПО НАДЗОРУ В СФЕРЕ ЗАЩИТЫ ПРАВ ПОТРЕБИТЕЛЕЙ И БЛАГОПОЛУЧИЯ ЧЕЛОВЕКА
ФГУЗ РостНИПЧИ Роспотребнадзора 344002, Ростов-на-Дону, ул. М.Горького, 117/40. |
|
(863) 240-27-03 Телефакс 267-02-23. http://www.rostnipchi.narod.ru E. mail: plague@aaanet.ru ОКПО 01898316 _____________________________________________________________________________ |
|
|
|
ОТЧЁТ
по результатам санитарно-эпидемиологических исследований на определение бактерицидных и вирулицидных свойств коагулянта
«Brilliant water of life»
Объект исследований: коагулянт «Brilliant water of life» по ТУ 2163-001-79232334-2007
Заявитель: ООО «Инновационная компания «ДАНА». Россия г. Ростов-на-Дону, ул.Московская, 23-1.Тел.:(863)227-02-16.
Сопроводительные документы: Заявление от 25 октября 2010 г, Санитарно-эпидемиологическое заключение № 61.РЦ.10.000.Т.001548.10.07 от 09.10.2007г, Сертификат соответствия № РОСС RU.AE81.Н03076 от 10.09.2010г, Свидетельство на товарный знак (знак обслуживания) № 370829, инструкция по применению коагулянта.
НД исследований:
Исследование бактерицидных и вирулицидных свойств препарата «Brilliant water of life» по ТУ 2163-001-79232334-2007 в модельных условиях проводили согласно нормативно-методических документов: Методические указания МУК 4.2.1884-04 по санитарно-микробиологическому и санитарно-паразитологическому анализу воды поверхностных водоёмов МЗ РФ, Москва-3 марта 2004 г.
I. Исследование бактерицидных свойств препарата
«Brilliant water of life»:
1.Штаммы: в качестве патогенного биологического агента (ПБА) при изучении бактерицидных свойств препарата «Brilliant water of life» использована культура Salmonella typhi 10396, входящая в III группу ПБА. Штамм был получен из коллекции музея живых культур РостНИПЧИ.
2. Питательные среды для накопления и выращивания ПБА: висмут-сульфитный агар, магниевый и селенитовый бульоны
3. Режимы исследования:
а) время экспозиции: 5 час; 24 час;
б) температура выращивания ПБА: 22оС; 37оС.
4. Методика исследования:
В ёмкости с простерилизованной водопроводной водой объёмом 1л вносили суточную агаровую культуру Salmonella typhi 10396 из расчета 10 м.к./мл (104/л) и добавляли препарат «Brilliant water of life» согласно инструкции по использованию коагулянта. Пробы инкубировали в течение 5 и 24 час при 37оС, а также при комнатной температуре. Контрольные исследования проводили в аналогичных режимах без добавления «Brilliant water of life». После инкубации проводили прямые посевы на плотные селективные среды (висмут-сульфитный агар) из поверхностного, среднего слоя и из образованного в результате коагуляции осадка, а в контрольных пробах из нижнего слоя жидкости.
Чтобы исключить возможность проявления остаточной устойчивости к коагулянту в результате агрегации бактерий, пробы воды после 5 час инкубации дополнительно засевали в две накопительные среды (магниевый и селенитовый бульон). После инкубации (24 час) делали высевы на плотные питательные среды согласно вышеприведённой методике.
5. Результаты исследования:
Через 5 часов рост сальмонеллы регистрировали только в контроле (таблица 1). Результаты микробиологических исследований после 24-х часов инкубации в пробах и в накопительных средах представлены в таблице 2.
Результаты микробиологического исследования водопроводной воды, содержащей ПБА III группы, после применения
«Brilliant water of life».
Инкубация в течение 5 час
Таблица 1
Опыт |
Контроль |
||
Прямой посев |
Прямой посев |
||
37о С |
22о С |
37оС |
22оС |
В.с. - р/н |
В.с. - р/н |
10 КОЕ |
8 КОЕ |
С.с. - р/н |
С.с - р/н |
15 КОЕ |
12 КОЕ |
Ос. - р/н |
Ос. - р/н |
Н.с. - 8 КОЕ |
Н.с. - 7 КОЕ |
Сокращения: В.с.- верхний слой
С.с.- средний слой
Н.с.- нижний слой
Ос.- осадок
р/н - роста нет
КОЕ - колониеобразующая единицы
Результаты микробиологического исследования водопроводной воды, содержащей ПБА III группы, после применения
«Brilliant water of life».
Инкубация в течение 24 час
Таблица 2
Опыт |
Высев из накопительной среды |
Контроль |
|||||
Прямой посев |
Магниевый бульон |
Селенитовый бульон |
Прямой посев |
||||
37оС |
22оС |
37оС |
22оС |
37оС |
22оС |
37оС |
22оС |
В.с.-р/н |
В.с.-р/н |
В.с.-р/н |
В.с.-р/н |
В.с.-р/н |
В.с.-р/н |
38 КОЕ |
27 КОЕ |
С.с.-р/н |
С.с-р/н |
С.с.-р/н |
С.с-р/н |
С.с.-р/н |
С.с-р/н |
25 КОЕ |
22 КОЕ |
Ос.-р/н |
Ос.-р/н |
Ос.- 3 КОЕ |
Ос.- 1 КОЕ |
Ос.- 4 КОЕ |
Ос.- 0 КОЕ |
Н.с. 21 КОЕ |
Н.с. 17 КОЕ |
Сокращения: В.с.- верхний слой
С.с.- средний слой
Н.с.- нижний слой
Ос.- осадок
р/н - роста нет
КОЕ - колониеобразующая единицы
II. Исследование вирулицидных свойств препарата «Brilliant water of life»:
1.Штаммы: в качестве вирусного тест-объекта при изучении вирулиицидных свойств препарата «Brilliant water of life» использован фаг Y.enterocolitica 1998. Штамм был получен из коллекции лаборатории Бактериофагов РостНИПЧИ.
2. Питательные среды для накопления и выращивания:
в качестве индикатора использовали культуру Y.enterocolitica 2012. Штамм был получен из коллекции музея живых культур РостНИПЧИ.
3. Режимы исследования:
а) время экспозиции: 5 час; 24 час;
б) температура выращивания ПБА: 22оС; 37оС.
4. Методика исследования:
2. В пробирки с простерилизованной водопроводной водой, объемом по 10 мл вносили фаг Y.enterocolitica 1998 из расчета 10кл/мл (10-7 разведение фага 1 мл.). Коагулянт добавляли из расчета 1 мл на 1 литр воды (0,01 мл на 10 мл воды). Инкубировали при комнатной температуре и при 37оС в течение 5 и 24 час. Контрольные исследования проводили в аналогичных режимах без добавления коагулянта. После инкубации проводили определение БОЕ (бляшкообразующие единицы) фага Y.enterocolitica 1998 по стандартной методике (методом агаровых слоев).
5. Результаты исследования: результаты исследования представлены в таблице 3. Полученные данные свидетельствуют об активности препарата по отношению к бактериальным вирусам.
Результаты микробиологического исследования водопроводной воды, контаминированной вируссодержащей суспензией,
после применения «Brilliant water of life»
Таблица 3
Опыт |
Контроль |
||||||
Инкубация 5 ч. |
Инкубация 24 ч. |
Инкубация 5 ч. |
Инкубация 24 ч. |
||||
22оС |
37о С |
22оС |
37о С |
22оС |
37о С |
22оС |
37о С |
0 |
0 |
0 |
0 |
4 |
1 |
3 |
0 |
Заключение
Исследование для целей санитарно-эпидемиологической экспертизы проб воды источников централизованного водоснабжения с целью определения санитарно-биологических показателей до и после применения коагулянта «Brilliant water of life» показало, что в соответствии с ТУ 2163-001-79232334-2007 в модельных исследованиях в дозах и рекомендованной производителем препарата технологией,
коагулянт «Brilliant water of life» проявляет выраженное
бактерицидное действие по отношению к ПБА III группы патогенности (Salmonella typhi 10396) и выраженное вирулицидное действие к бактериальным вирусам (фагу Y.enterocolitica 1998).
ФЕДЕРАЛЬНОЕ ГОСУДАРСТВЕННОЕ УЧРЕЖДЕНИЕ ЗДРАВООХРАНЕНИЯ
РОСТОВСКИЙ -на- ДОНУ ОРДЕНА ТРУДОВОГО КРАСНОГО ЗНАМЕНИ
НАУЧНО-ИССЛЕДОВАТЕЛЬСКИЙ ПРОТИВОЧУМНЫЙ ИНСТИТУТ
ФЕДЕРАЛЬНОЙ СЛУЖБЫ ПО НАДЗОРУ В СФЕРЕ ЗАЩИТЫ ПРАВ ПОТРЕБИТЕЛЕЙ И БЛАГОПОЛУЧИЯ ЧЕЛОВЕКА
ФГУЗ РостНИПЧИ Роспотребнадзора 344002, Ростов-на-Дону, ул. М.Горького, 117/40. |
|
(863) 240-27-03 Телефакс 267-02-23. http://www.rostnipchi.narod.ru E. mail: plague@aaanet.ru ОКПО 01898316 _____________________________________________________________________________ |
|
|
|
ОТЧЁТ
по результатам исследований токсических и бактерицидных свойств препарата «Brilliant water of life» на модели культуры клеток
Объект исследований: коагулянт «Brilliant water of life» по ТУ 2163-001-79232334-2007
Заявитель: ООО «Инновационная компания «ДАНА». Россия г. Ростов-на-Дону, ул. Московская, 23-1. Тел.: (863) 227-02-16.
Сопроводительные документы: Заявление от 25 октября 2010 г, Санитарно-эпидемиологическое заключение № 61.РЦ.10.000.Т.001548.10.07 от 09.10.2007 г, Сертификат соответствия № РОСС RU.AE81.H03076 от 10.09.2010г., Свидетельство на товарный знак (знак обслуживания) № 370829, инструкция по применению коагулянта.
І. Оценка токсичности препарата «Brilliant water of life»
1. Клеточные перевиваемые линии: в опытах использовали монослойные клеточные культуры L-929 (мышиные фибробласты), Hela (эпителиоидная карцинома шейки матки человека); суспензионные культуры человеческого происхождения – К-562 (Т-лимфоциты), U-937 (моноцитарная линия).
2. Питательные среды: культивирование клеточных линий проводили в средах RPMI (Sigma), DMEM (Sigma).
3. Режимы исследования:
а) время экспозиции: 24 часа, 72 часа;
б) условия и температура культивирования: в СО2-инкубаторе (Nuare) при 37ºС.
4. Методика исследования:
Монослойные клеточные культуры предварительно пассировали в среде RPMI-1640 с 10 % сыворотки плода коровы и 2мМ глютамина. Общепринятыми методами с помощью растворов версена и трипсина готовили клеточную суспензию. В 96-луночные планшеты вносили клеточную суспензию L-929, Hela из расчета 5000 кл/лунку. Суспензионные культуры К-562, U-937 вносили в 96-луночные планшеты по 10000 кл/лунку. Раствор «Brilliant water of life» титровали, начиная с 1:10 до 1:800000, и вносили в лунки с клетками эукариот. Их жизнеспособность и морфологию после совместной инкубации с коагулянтом учитывали через 24 и 72 часа. Реакцию клеток оценивали в инвертированном микроскопе (Reichert) по живой культуре клеток с прижизненным окрашиванием трипановым синим.
5. Результаты исследований:
Сравнение опытных и контрольных образцов через 24 часа по жизнеспособности клеточных культур, их морфологии, отсутствию детрита показало, что при всех исследуемых разведениях «Brilliant water of life» не токсичен (табл. 1). Аналогичные результаты зарегистрированы и через 72 часа. Важен также и другой факт, установленный на модели культуры клеток, что испытуемый коагулянт обладает бактерицидным эффектом. Обычно в среды для культивирования клеточных линий добавляют гентамицин 100 мкг/мл. В данных опытах антибиотик был исключен из сред, и клеточные культуры подвергались воздействию только коагулянта. Результаты эксперимента свидетельствуют, что даже при его максимальном разведении в лунках планшета не зарегистрирован рост бактериальной флоры.
Вывод: Исследования на модели культуры показали, что коагулянт «Brilliant water of life» не токсичен и обладает выраженным бактерицидным эффектом.
Таблица 1
Оценка токсической и бактерицидной активности «Brilliant water of life» на модели культуры клеток
№ п/п |
Культуры клеток |
Разведения «Brilliant water of life» |
|||||||||
|
1:100 |
1:1 т |
1:10 т |
1:50 т |
1:100 т |
1:200 т |
1:400 т |
1:600 т |
1:800 т |
||
1 |
L-929 |
|
не токсичен рост бактериальной флоры отсутствует |
||||||||
2 |
Hela |
не токсичен рост бактериальной флоры отсутствует |
|||||||||
3 |
K-562 |
не токсичен рост бактериальной флоры отсутствует |
|||||||||
4 |
U-937 |
не токсичен рост бактериальной флоры отсутствует |